葡萄糖氧化酶（GOD）測試盒

微量法 100管/48樣

正式測定前取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義

GOD（EC 1.1.3.4）廣泛存在于動物、和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并產生H2O2，是生物體中產生活性氧的代謝途徑之一。

測定原理

GOD催化產生H2O2，過氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林偶聯酚，生成有色化合物，在500 nm有特征吸收峰，顏色深淺與GOD活性成線性關系。

試驗中所需的儀器和設備

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水

試劑的組成和配制

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；

緩沖液：液體30mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入10mL緩沖液充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存一個月；

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入10mL緩沖液充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存一個月；

樣品測定的準備 

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟

1. 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至500nm，蒸餾水調零。

2. 試劑一和試劑二的配制：參見試劑的組成和配制。

3、煮沸樣本的準備：取200μL樣本至新的EP管中，95℃水浴10min，冷卻至室溫后，8000g 4℃離心10min，取上清作為對照管的煮沸樣本待測。

4、測定操作表

混勻，35'C保溫15min后，于500nm波長處讀取吸光度。ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需設一個對照管。

GOD活力單位的計算

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

回歸方程為y = 2.8348x - 0.0169；x為H2O2標準品濃度（μmol/mL），y為ΔA。

1、血清（漿）GOD活力的計算

單位定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產生1nmol H2O2為一個酶活力單位。

GOD（nmol/min/mL）= (ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷V樣÷T×1000=58.8×(ΔA+0.0169)

2、細菌、細胞或組織GOD活力的計算

（1）按蛋白濃度計算

單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產生1nmol H2O2為一個酶活力單位。

GOD（nmol/min/mg prot）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷(V樣×Cpr) ×1000÷T

=58.8×(ΔA+0.0169)÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位定義：每g組織每分鐘催化產生1nmol H2O2為一個酶活力單位。

GOD（nmol/min/g鮮重）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ×1000÷T

=58.8×(ΔA+0.0169)÷W

（3）按細菌或細胞密度計算

單位定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol H2O2為一個酶活力單位。

GOD（nmol/min/104 cell）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷(500×V樣÷V樣總) ×1000÷T

=0.118×(ΔA+0.0169)

V反總：反應體系總體積，0.125mL； V樣：加入樣本體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，15 min； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。

 b.用96孔板測定的計算公式如下

回歸方程為y = 1.4174x - 0.0169；x為H2O2標準品濃度（μmol/mL），y為ΔA。

1、血清（漿）GOD活力的計算

單位定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產生1nmol H2O2為一個酶活力單位。

GOD（nmol/min/mL）= (ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反總÷V樣÷T×1000=118×(ΔA+0.0169)

2、細菌、細胞或組織GOD活力的計算

（1）按蛋白濃度計算

單位定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產生1nmol H2O2為一個酶活力單位。

GOD（nmol/min/mg prot）=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反總÷(V樣×Cpr) ×1000÷T

=118×(ΔA+0.0169)÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算

單位定義：每g組織每分鐘催化產生1nmol H2O2為一個酶活力單位。

GOD（nmol/min/g鮮重）=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ×1000÷T

=118×(ΔA+0.0169)÷W

（3）按細菌或細胞密度計算

單位定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol H2O2為一個酶活力單位。

GOD（nmol/min/104 cell）=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反總÷(500×V樣÷V樣總) ×1000÷T

=0.235×(ΔA+0.0169)

V反總：反應體系總體積，0.125mL； V樣：加入樣本體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，15 min； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國內試劑耗材經銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務。

5. 公司代理眾多有名生命科學領域的研究試劑、儀器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質量保證，所有產品都提供售后服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式，為客戶全面解決實驗、生產、開發需求。公司整合國際與國內資源，加強網絡建設，提高公司內部運作效率，為客戶提供方便、快捷的服務。

7. 公司突出創新思維，提高工作效能，減低運作成本，為客戶提供優惠的價格。

葡萄糖氧化酶（GOD）測試盒