酰基轉移酶（AAT）測試盒

微量法 100管/96樣

注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

AAT是一個多功能蛋白大家族，主要負責催化生物體內各種酰基化和去?；磻?，在基因表達、代謝和信號傳導中具有重要作用。

測定原理：

AAT催化乙酰CoA轉移乙酰基到丁醇，釋放的CoA還原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰，測定412 nm吸光度增加速率可計算AAT活性。

自備儀器和用品：

研缽、冰、臺式離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋、無水乙醇。

試劑組成和配制：

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存。

試劑三：粉劑×1支，4℃避光保存。

粗酶液提?。?/strong>

1. 組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。

2. 細菌、真菌：按照細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

3. 液體：直接檢測。

AAT測定操作：

1、分光光度計/酶標儀預熱30min，調節波長到412 nm，蒸餾水調零。

2、工作液的配制：臨用前在試劑二瓶中加入18mL試劑一，充分混勻待用。用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。

3、試劑三的配制：臨用前加無水乙醇1mL充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存。

4、 空白管：在Ep管或96孔板中加入10μL提取液和180μL工作液，充分混勻，35℃反應15min，加入10μL試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測定412nm處吸光值，記為A空白管。

5、 測定管：在Ep管或96孔板中加入10μL樣本和180μL工作液，充分混勻，35℃反應15min，加入10μL試劑三，充分混勻，25℃靜置10min，測定412nm處吸光值，記為A測定管。△A=A測定管- A空白管，空白管只要做一管。

AAT活性計算：

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

（1）按照蛋白濃度計算

活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。

AAT (nmol/min/mg prot) = △A ÷（×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T = 98.04×△A÷Cpr

（2）按照樣本質量計算

活性單位定義：每克組織每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。

AAT (nmol/min /g 鮮重) = △A ÷（×d）×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ÷T 

= 98.04×△A÷W

（3）按細胞數量計算

活性單位定義：每104個細胞每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。

AAT (nmol/min/104cell) = △A ÷（×d）×V反總÷(細胞數量×V樣÷V樣總) ÷T

= 98.04×△A÷ 細胞數量

（4）按液體體積計算

活性單位定義：每毫升樣品每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。

AAT (nmol/min/mL) = △A ÷（×d）×V反總÷V樣÷T

 = 98.04×△A

：TNB消光系數，13600L/mol/cm；d：比色皿光徑：1cm；V反總：反應總體積，0.2mL；V樣：加入反應體系中上清液體積，0.01mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：蛋白含量，mg/mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，15 min。

b.使用96孔板測定的計算公式如下

（1）按照蛋白濃度計算

活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。

AAT (nmol/min/mg prot) = △A ÷（×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T 

=196.08×△A÷Cpr

（2）按照樣本質量計算

活性單位定義：每克組織每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。

AAT (nmol/min /g 鮮重) = △A ÷（×d）×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ÷T 

= 196.08×△A÷W

（3）按細胞數量計算

活性單位定義：每104個細胞每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。

AAT (nmol/min/104cell) = △A ÷（×d）×V反總÷(細胞數量×V樣÷V樣總) ÷T

=196.08×△A÷ 細胞數量

（4）按液體體積計算

活性單位定義：每毫升樣品每分鐘催化產生1nmol TNB定義為一個酶活單位。

AAT (nmol/min/mL) = △A ÷（×d）×V反總÷V樣÷T

 = 196.08×△A

：TNB消光系數，13600L/mol/cm；d：96孔板光徑：0.5cm；V反總：反應總體積，0.2mL；V樣：加入反應體系中上清液體積，0.01mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：蛋白含量，mg/mL；W：樣本質量，g；T：反應時間，15min。

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國內試劑耗材經銷代理。

2. 國外試劑的訂購?？商峁W美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務。

5. 公司代理眾多有名生命科學領域的研究試劑、儀器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質量保證，所有產品都提供售后服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式，為客戶全面解決實驗、生產、開發需求。公司整合國際與國內資源，加強網絡建設，提高公司內部運作效率，為客戶提供方便、快捷的服務。

7. 公司突出創新思維，提高工作效能，減低運作成本，為客戶提供優惠的價格。

?；D移酶（AAT）測試盒