jenabioscience:血液DNA制備-溶液試劑盒

Blood DNA Preparation - Solution Kit——基于溶液從全血中純化基因組DNA

Jena Bioscience由Max-Planck-Institute of Molecular Physiology(Dortmund)的一組科學(xué)家于1998年成立，利用超過(guò)25年的學(xué)術(shù)知識(shí)為100多個(gè)國(guó)家的研究和行業(yè)客戶(hù)開(kāi)發(fā)創(chuàng)新試劑。

供一般實(shí)驗(yàn)室使用。

運(yùn)輸:在環(huán)境溫度下裝運(yùn)

儲(chǔ)存條件:在環(huán)境溫度下儲(chǔ)存

保質(zhì)期:12個(gè)月

描述:
血液DNA制備試劑盒設(shè)計(jì)用于從全血樣品中方便快速地分離基因組DNA。基于溶液的系統(tǒng)最大限度地減少了在基于旋轉(zhuǎn)柱/過(guò)濾的方法中可能存在的DNA斷裂。因?yàn)闆](méi)有使用苯酚或氯仿，所以它是安全的，并且不會(huì)產(chǎn)生任何有害的廢物。
基于溶液的基因組DNA純化試劑盒保證了最小的DNA片段化，并產(chǎn)生最大150 kb的DNA。

預(yù)期收益率:
基因組DNA的產(chǎn)量因樣品而異，取決于加工材料的數(shù)量、質(zhì)量和類(lèi)型。大約的數(shù)量。每次制備300 μl全血，可獲得30-50 μg純化的DNA。如果需要更大量的DNA，將制備物放大10倍是容易的。

內(nèi)容:
紅細(xì)胞裂解液
細(xì)胞裂解液
蛋白質(zhì)沉淀溶液
洗滌緩沖液(使用前，按照瓶子上的指示添加96-99 %的乙醇)
DNA水合溶液

由您提供:
異丙醇(異丙醇)> 99 %
96-99 %乙醇
微管1.5或2.0毫升
65℃的加熱塊或水浴

準(zhǔn)備程序:
開(kāi)始前，提供> 99 %的異丙醇(2-丙醇)(不包括在套件中)。
對(duì)于S包(100包):將48毫升96-99 %的乙醇(不包含在試劑盒中)添加到清洗緩沖瓶中。

1細(xì)胞裂解:

• 用移液管將900 μl紅細(xì)胞裂解液移至1.5 ml微管中，加入300 μl全血或骨髓，倒置10次。
• 在室溫下孵育3分鐘，偶爾倒置。請(qǐng)注意:對(duì)于制備前1小時(shí)內(nèi)采集的新鮮血液，將孵育時(shí)間增加至10分鐘，以確保紅細(xì)胞*全溶解。
• 以15，000 g的速度離心30秒
• 用移液管移去上清液，留下可見(jiàn)的細(xì)胞沉淀。確保殘留液體不超過(guò)20 μl。這是后續(xù)步驟中有效蛋白質(zhì)和DNA沉淀的關(guān)鍵點(diǎn)。
• 用力搖晃試管10秒鐘，使白細(xì)胞重新懸浮在殘留液體中。白細(xì)胞沉淀應(yīng)該*全重新懸浮。
• 向重新懸浮的細(xì)胞中加入300 μl細(xì)胞裂解液，并上下吸取以裂解細(xì)胞，直到看不到團(tuán)塊。
• 對(duì)于肝素處理的血液，在65°C下加熱白細(xì)胞沉淀10分鐘以促進(jìn)溶解。

2蛋白質(zhì)沉淀:

• 向細(xì)胞裂解液中加入100 μl蛋白質(zhì)沉淀溶液。
• 劇烈渦旋20秒鐘以充分混合。應(yīng)該可以看到沉淀蛋白質(zhì)的微小顆粒(沒(méi)有結(jié)塊)。
• 以15，000 g離心1分鐘。
• 沉淀的蛋白質(zhì)應(yīng)該形成緊密的黑色顆粒。如果蛋白質(zhì)沉淀不緊密，重復(fù)渦旋，然后在冰上孵育5分鐘，再次離心。

3 DNA沉淀:

• 用移液管將300 μl濃度大于99 %的異丙醇移入干凈的1.5 ml微量管中，并加入上清液。
• 輕輕倒置1分鐘，混合樣品。
• 以15，000 g離心1分鐘。DNA應(yīng)該是一個(gè)白色的小球。
• 在干凈的吸水紙上簡(jiǎn)單地丟棄上清液和引流管。
• 加入500 μl洗滌緩沖液，翻轉(zhuǎn)試管數(shù)次，以洗滌DNA沉淀。
• 以15，000 g離心1分鐘。
• 小心丟棄乙醇，并在室溫下干燥約10至15分鐘。

4 DNA水合作用:

• 加入50-100 μl DNA水合溶液。
• 中速渦旋5秒鐘以混合。
• 將樣品在65°C下培養(yǎng)30分鐘，以加速?gòu)?fù)水。
• 將DNA儲(chǔ)存在4°C。對(duì)于長(zhǎng)期儲(chǔ)存，將樣品放置在-20°C或-80°C

上海牧榮生物科技有限公司

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